原代細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中較為重要的一環(huán)，同時(shí)該實(shí)驗(yàn)也具有一定的難度，需要掌握一些小技巧，才能更快上手、更好操作、更不容易“翻車”，今天我們就來(lái)一起總結(jié)一下，原代細(xì)胞培養(yǎng)，都有哪些注意事項(xiàng)。

常見(jiàn)的原代細(xì)胞類型

上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、肝細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、毛細(xì)胞、血細(xì)胞、干細(xì)胞。

原代細(xì)胞的優(yōu)缺點(diǎn)

 

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系

能夠培養(yǎng)的細(xì)胞系，已經(jīng)獲得了通過(guò)隨機(jī)突變或通過(guò)修飾（例如癌癥基因的人工表達(dá)）轉(zhuǎn)化的癌細(xì)胞系中的無(wú)限增殖（永生化）的能力。連續(xù)細(xì)胞系通常比原代細(xì)胞更堅(jiān)固，更易于操作。它們具有無(wú)限的增長(zhǎng)潛力，是獲取基本信息的快速簡(jiǎn)便方法。使用連續(xù)細(xì)胞系的一些缺點(diǎn)是它們是經(jīng)過(guò)基因修飾/轉(zhuǎn)化的，可以改變生理特性并且不代表體內(nèi)狀態(tài)，并且隨著時(shí)間的流逝，這可能會(huì)進(jìn)一步改變。

而原代培養(yǎng)得來(lái)的細(xì)胞不具備無(wú)限分裂的能力，但可以相對(duì)更好地還原生物體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。

 

倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？

倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。

原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可能存在的錯(cuò)誤

污染：轉(zhuǎn)移主要組織進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)需要注意避免污染。

pH值變化：這可能是由于培養(yǎng)基中的鹽分不正確，細(xì)菌或真菌污染，碳酸氫鹽緩沖液不足，二氧化碳張力不正確等引起的。

粘附性不足（細(xì)胞不貼壁）：培養(yǎng)基中不含附著因子（attachment factors）或附著因子不足，培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基污染，細(xì)胞被胰蛋白酶過(guò)度消化等。

生長(zhǎng)緩慢：原因包括培養(yǎng)基的pH值變化，必需的促進(jìn)生長(zhǎng)的成分/因子耗盡，低污染，試劑儲(chǔ)藏不當(dāng)?shù)取?/span>

細(xì)胞死亡：溫度波動(dòng)，二氧化碳含量過(guò)低，在融化和/或冷凍保存過(guò)程中細(xì)胞受損，有毒代謝產(chǎn)物濃度增加，培養(yǎng)基中的滲透壓失衡導(dǎo)致細(xì)胞存活率降低。

沉淀（pH不變）：由于使用了冷凍培養(yǎng)基，在pH不變的培養(yǎng)基中可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時(shí)可能會(huì)沉淀出粉末狀的培養(yǎng)基成分。

細(xì)胞結(jié)塊（細(xì)胞不貼壁且結(jié)塊）：懸浮細(xì)胞可能由于鈣、鎂離子的存在或細(xì)胞裂解及DNA釋放（過(guò)度用蛋白水解酶消化）而結(jié)塊。

誘導(dǎo)變異性：多種試劑和培養(yǎng)基會(huì)誘導(dǎo)原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異，研究者的處理手法也可能導(dǎo)致原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異。

血清在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的重要性不言而喻：

• 提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。

• 提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

• 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

• 是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

• 參與細(xì)胞凍存。

• ......

一款優(yōu)質(zhì)的血清，能成為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的“*輔助”。

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